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1、质粒用限制酶Ⅰ，目的基因用限制酶Ⅱ。

2、因为目的基因要两边都切到，所以答案很显然是用限制酶Ⅱ。

3、然后质粒上有两个标记基因，如果也用限制酶Ⅱ，那么两个标记基因都会被破坏，在下一步筛选的过程中就起不到作用了。

4、所以就用限制酶1来切。

5、然后，能在含氨苄青霉素的培养基中生存，但不能再含四环素的培养基中生存的就是所需要的重组质粒了。

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